একটি জগৎ কল্পনা করুন যা খালি চোখে অদৃশ্য, যেখানে কোষগুলি তারার মতো মিটমিট করে এবং অণুজীবগুলি মায়াবী আত্মার মতো নৃত্য করে। অণুবীক্ষণ যন্ত্রটি এই লুকানো জগৎ উন্মোচন করার চাবিকাঠি হিসেবে কাজ করে, যা কেবল আমাদের দৃষ্টি প্রসারিত করে না বরং জীবনের মৌলিক প্রকৃতি সম্পর্কে আমাদের বোঝাপড়াকেও প্রসারিত করে। এই নিবন্ধটি আপনার অণুবীক্ষণিক অনুসন্ধানে সহায়তা করার জন্য অণুবীক্ষণ যন্ত্রের মূলনীতি, প্রকারভেদ, ব্যবহারের কৌশল এবং রক্ষণাবেক্ষণ পদ্ধতির একটি গভীর পরীক্ষা প্রদান করে।
অণুবীক্ষণ যন্ত্রের মূল বিষয়: বিবর্ধন এবং রেজোলিউশন
যে কোনও অণুবীক্ষণ যন্ত্রের মূল কাজ হল বিবর্ধন এবং রেজোলিউশন। বিবর্ধন বলতে একটি বস্তুর প্রকৃত আকার পরিবর্তন না করে এর দৃশ্যমান আকার বৃদ্ধি করা বোঝায়। অণুবীক্ষণবিদ্যায়, বিবর্ধন ক্ষমতা চিত্র এবং প্রকৃত বস্তুর আকারের মধ্যেকার অনুপাতকে উপস্থাপন করে। অণুবীক্ষণ যন্ত্রগুলি সাধারণত স্লাইডে স্থাপন করা পাতলা নমুনা পরীক্ষা করে, যা একক-কোষী জীব, অণুজীব, কোষ এবং কোষীয় কাঠামো পর্যবেক্ষণের জন্য আদর্শ করে তোলে।
তবে, শুধুমাত্র বিবর্ধনই যথেষ্ট নয়—রেজোলিউশন সমানভাবে গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে। রেজোলিউশন দুটি সংলগ্ন বিন্দুর মধ্যে পার্থক্য করার জন্য একটি অণুবীক্ষণ যন্ত্রের ক্ষমতাকে সংজ্ঞায়িত করে, যা দুটি ঘনিষ্ঠভাবে স্থাপন করা বস্তুকে স্পষ্টভাবে আলাদা করা যেতে পারে এমন সর্বনিম্ন দূরত্বকে উপস্থাপন করে। উচ্চ-রেজোলিউশন অণুবীক্ষণ যন্ত্রগুলি আরও তীক্ষ্ণ, আরও বিস্তারিত চিত্র তৈরি করে।
রেজোলিউশনের উপাদান
অণুবীক্ষণ যন্ত্রের রেজোলিউশন অপটিক্যাল লেন্সের সংখ্যাসূচক অ্যাপারচার এবং পর্যবেক্ষণের জন্য ব্যবহৃত আলোর তরঙ্গদৈর্ঘ্যের উপর নির্ভর করে। বিশেষ করে, রেজোলিউশন দুটি প্রকারের সমন্বয়ে গঠিত:
-
অনুভূমিক রেজোলিউশন:
অপটিক্যাল অক্ষের সাথে লম্বভাবে একটি তলে সংলগ্ন বিন্দুগুলিকে আলাদা করার জন্য অণুবীক্ষণ যন্ত্রের ক্ষমতা পরিমাপ করে, যা নমুনার তলে দুটি পৃথক অনুভূমিক বিন্দুর মধ্যেকার ক্ষুদ্রতম দূরত্ব হিসাবে সংজ্ঞায়িত করা হয়।
-
অক্ষীয় রেজোলিউশন:
অপটিক্যাল অক্ষ বরাবর সংলগ্ন বিন্দুগুলিকে আলাদা করার জন্য অণুবীক্ষণ যন্ত্রের ক্ষমতা মূল্যায়ন করে, যা নমুনার তলে দুটি পৃথক উল্লম্ব বিন্দুর মধ্যেকার ক্ষুদ্রতম দূরত্বকে উপস্থাপন করে।
ক্ষেত্রের গভীরতা এবং দৃশ্যের ক্ষেত্র
বিবর্ধন এবং রেজোলিউশনের বাইরে, ক্ষেত্রের গভীরতা এবং দৃশ্যের ক্ষেত্র অপরিহার্য অণুবীক্ষণিক পর্যবেক্ষণের পরামিতি গঠন করে।
-
ক্ষেত্রের গভীরতা:
উল্লম্ব পরিসর যার মধ্যে একটি নমুনা স্পষ্টভাবে ফোকাস করা থাকে, যা নিকটতম থেকে দূরতম ফোকাস করা তল পর্যন্ত বিস্তৃত। উচ্চ-ক্ষমতার বস্তুগুলি সাধারণত অগভীর ক্ষেত্রের গভীরতা বৈশিষ্ট্যযুক্ত করে, যেখানে নিম্ন-ক্ষমতার বস্তুগুলি বৃহত্তর গভীরতা প্রদান করে।
-
দৃশ্যের ক্ষেত্র:
অণুবীক্ষণ যন্ত্রের মাধ্যমে দৃশ্যমান পর্যবেক্ষণযোগ্য এলাকা। উচ্চতর বিবর্ধনের ফলে দৃশ্যের ক্ষেত্র ছোট হয়।
ফোকাসিং
যখন চিত্রটি আইপিসের মাধ্যমে তীক্ষ্ণ এবং পরিষ্কার দেখায়, তখন নমুনাটি পছন্দসই বিবর্ধনে সঠিকভাবে ফোকাস করা হয়েছে।
অণুবীক্ষণ যন্ত্রের প্রকারভেদ এবং গঠন
ব্যবহার এবং অপারেটিং নীতিগুলির উপর ভিত্তি করে অণুবীক্ষণ যন্ত্রগুলি ব্যাপকভাবে পরিবর্তিত হয়। এই বিভাগে দুটি সাধারণ প্রকারের উপর দৃষ্টি নিবদ্ধ করা হয়েছে: স্টেরিও অণুবীক্ষণ যন্ত্র এবং যৌগিক অণুবীক্ষণ যন্ত্র।
A. স্টেরিও অণুবীক্ষণ যন্ত্র
স্টেরিও অণুবীক্ষণ যন্ত্র, যা ডিসেকটিং অণুবীক্ষণ যন্ত্র নামেও পরিচিত, প্রধানত অস্বচ্ছ ত্রিমাত্রিক নমুনা পরীক্ষা করে, স্টেরিওস্কোপিক চিত্র তৈরি করে। তাদের বিবর্ধন সাধারণত 2x থেকে 100x এর মধ্যে থাকে, যা শিলা, গাছপালা, ফুল এবং অমেরুদণ্ডী প্রাণী পর্যবেক্ষণের জন্য উপযুক্ত করে তোলে।
1. স্টেরিও অণুবীক্ষণ যন্ত্রের গঠন
স্টেরিও অণুবীক্ষণ যন্ত্রে বেশ কয়েকটি মূল উপাদান রয়েছে:
-
স্টেরিও হেড:
আইপিসের সাথে সংযোগ স্থাপন করে
-
সাধারণত 10x বিবর্ধন, নিয়মিত বাইনোকুলার টিউবে মাউন্ট করা হয়
পর্যবেক্ষণ লেন্স
-
ডায়োপ্টার সমন্বয়:
চোখের স্ট্রেন প্রতিরোধ করতে আন্তঃচক্ষু দৃষ্টির পার্থক্যগুলির জন্য ক্ষতিপূরণ করে
-
জুম বিবর্ধন নব:
বিবর্ধন ক্ষমতা সমন্বয় করে
-
ফোকাসিং নব:
ফোকাস সমন্বয়ের জন্য উল্লম্বভাবে মাথা সরানোর ব্যবস্থা করে
-
নিয়ন্ত্রিত তীব্রতা সহ সমন্বিত বেস আলো
নিয়মিত উজ্জ্বলতার সাথে প্রেরিত বা প্রতিফলিত আলো সরবরাহ করে
-
আর্ম/পিলার:
মাথা এবং উপাদানগুলিকে সমর্থন করে
-
সম্পূর্ণ অণুবীক্ষণ যন্ত্রের ভিত্তি
নমুনা স্থাপনের জন্য স্টেজ ধারণ করে, প্রায়শই অপসারণযোগ্য কালো/সাদা প্লেট বা প্রেরিত আলোর ক্ষমতা সহ
2. স্টেরিও অণুবীক্ষণ যন্ত্রের পরিচালনা
সঠিক পরিচালনা এবং রক্ষণাবেক্ষণ যন্ত্রের জীবনকাল বাড়ায় এবং সর্বোত্তম কর্মক্ষমতা নিশ্চিত করে:
-
সর্বদা উভয় হাতে পরিবহন করুন—একটি আর্মকে সমর্থন করে, অন্যটি বেসকে—অণুবীক্ষণ যন্ত্রটিকে খাড়া রেখে
-
ব্যবহারকারীর থেকে মুখ করে আর্ম রেখে, প্রান্ত থেকে দূরে একটি স্থিতিশীল পৃষ্ঠের উপর স্থাপন করুন
-
ধুলাবালি থেকে রক্ষার আচ্ছাদনটি সরান এবং ভাঁজ করুন
-
বিদ্যুৎ সংযোগ করুন, যা ট্রিপিংয়ের ঝুঁকি তৈরি করবে না
-
বেস আলোকসজ্জা সক্রিয় করুন এবং প্রয়োজন অনুযায়ী উজ্জ্বলতা সমন্বয় করুন
3. স্টেরিও অণুবীক্ষণ যন্ত্রের রক্ষণাবেক্ষণ
ব্যবহারের পরে যত্ন যন্ত্রের কার্যকারিতা বজায় রাখে:
-
স্টেজ থেকে নমুনা সরান
-
আলোকসজ্জা বন্ধ করুন এবং ঠান্ডা হতে দিন
-
সবচেয়ে কম বিবর্ধনে পুনরায় সেট করুন
-
স্টেজ পৃষ্ঠ পরিষ্কার করুন
-
পাওয়ার কর্ডটি আইপিসের চারপাশে (আর্মের চারপাশে নয়) মুড়ে রাখুন
-
C. ভেজা মাউন্ট প্রস্তুতি
-
B. যৌগিক অণুবীক্ষণ যন্ত্র
যৌগিক অণুবীক্ষণ যন্ত্রগুলি সাধারণ অণুবীক্ষণ যন্ত্রের তুলনায় উচ্চতর বিবর্ধন (সাধারণত 40x-1000x) এবং শ্রেষ্ঠ চিত্রের গুণমান অর্জনের জন্য একাধিক লেন্স সিস্টেম ব্যবহার করে।
1. যৌগিক অণুবীক্ষণ যন্ত্রের গঠন
এই নির্ভুল যন্ত্রগুলিতে অসংখ্য বিশেষ উপাদান রয়েছে:
বেস:
-
সম্পূর্ণ অণুবীক্ষণ যন্ত্রের ভিত্তি
কনডেনসার:
-
স্লাইডের উপর আলো ফোকাস করার জন্য স্টেজ এর নিচে স্থাপন করা হয়, যা সমন্বয় নবগুলির মাধ্যমে নিয়ন্ত্রিত হয়
আলোকরশ্মি:
-
নিয়ন্ত্রিত তীব্রতা সহ সমন্বিত বেস আলো
আর্ম:
-
উপরের উপাদানগুলিকে সমর্থনকারী কাঠামোগত কাঠামো
ঘূর্ণায়মান নোজপিস:
-
একাধিক বস্তু ধারণকারী ঘূর্ণায়মান টাররেট
স্টেজ:
-
সঠিক স্লাইড পজিশনিংয়ের জন্য যান্ত্রিক নিয়ন্ত্রণ সহ প্ল্যাটফর্ম
আইরিস ডায়াফ্রাম:
-
নমুনাতে পৌঁছানো আলোর পরিমাণ নিয়ন্ত্রণ করে
কোর্স/ফাইন ফোকাস নব:
-
দ্রুত এবং সুনির্দিষ্ট ফোকাসিংয়ের জন্য পৃথক নিয়ন্ত্রণ
আইপিস:
-
সাধারণত 10x বিবর্ধন, নিয়মিত বাইনোকুলার টিউবে মাউন্ট করা হয়
অবজেক্টিভস:
-
বিভিন্ন বিবর্ধন প্রদানকারী প্রাথমিক অপটিক্যাল উপাদান:
4X: স্ক্যানিং অবজেক্টিভ
-
10X: কম পাওয়ার
-
40X: উচ্চ ক্ষমতা
-
100X: তেল নিমজ্জন
-
2. তেল নিমজ্জন কৌশল
100X অবজেক্টিভ কাচের স্লাইড এবং অবজেক্টিভ লেন্সের মধ্যে প্রতিসরাঙ্ক সূচকগুলির সাথে মিল রেখে রেজোলিউশন সর্বাধিক করতে নিমজ্জন তেল প্রয়োজন। অন্যান্য অবজেক্টিভগুলির সাথে তেল ব্যবহার করবেন না বা তেল ছাড়া 100X অবজেক্টিভ পরিচালনা করবেন না।
সঠিক তেল নিমজ্জন পদ্ধতি:
প্রথমে 40X বিবর্ধনের অধীনে সাবধানে নমুনাগুলি কেন্দ্র করুন
-
নোজপিসটিকে 40X এবং 100X অবস্থানের মধ্যে অর্ধেক ঘোরান
-
নমুনার উপরে সরাসরি একটি ছোট তেলের ফোঁটা প্রয়োগ করুন
-
100X অবজেক্টিভটিকে তেলে ঘোরান
-
ব্যবহারের পরে, লেন্সের কাগজ এবং উপযুক্ত ক্লিনার দিয়ে অবজেক্টিভটি ভালভাবে পরিষ্কার করুন
-
3. যৌগিক অণুবীক্ষণ যন্ত্রের পরিচালনা
আর্ম এবং বেস সমর্থন করে উভয় হাতে পরিবহন করুন
-
ব্যবহারকারীর থেকে মুখ করে আর্ম রেখে নিরাপদে স্থাপন করুন
-
ধুলাবালি থেকে রক্ষার আচ্ছাদনটি সরান এবং সঠিকভাবে সংরক্ষণ করুন
-
যদি ভাঁজ করা অবস্থায় সংরক্ষণ করা হয় তবে কাজের অবস্থানে বাইনোকুলার হেডটি সামঞ্জস্য করুন
-
বাধা তৈরি না করে পাওয়ার সংযোগ করুন
-
4X অবজেক্টিভটিকে অবস্থানে ঘোরান এবং কাজের দূরত্ব সর্বাধিক করুন
-
আলোকসজ্জা সক্রিয় করুন এবং তীব্রতা সমন্বয় করুন
-
আরামদায়ক দেখার জন্য ইন্টারপিউপিলারি দূরত্ব কাস্টমাইজ করুন
-
4. যৌগিক অণুবীক্ষণ যন্ত্রের রক্ষণাবেক্ষণ
আলোকরশ্মি বন্ধ করুন
-
উপযুক্ত লেন্স উপকরণ দিয়ে সমস্ত অপটিক্স পরিষ্কার করুন
-
স্লাইড এবং ধ্বংসাবশেষ থেকে স্টেজ পরিষ্কার করুন
-
4X অবস্থানে ফেরত যান
-
স্টেজটি সম্পূর্ণরূপে নামিয়ে দিন
-
পাওয়ার সংযোগ বিচ্ছিন্ন করুন এবং কর্ডগুলি সঠিকভাবে সংরক্ষণ করুন
-
ধুলাবালি থেকে রক্ষার আচ্ছাদনটি প্রতিস্থাপন করুন
-
C. ভেজা মাউন্ট প্রস্তুতি
ভেজা মাউন্ট তরল নমুনা পর্যবেক্ষণের সুযোগ দেয়:
স্লাইড কেন্দ্রে একটি তরল ফোঁটা রাখুন
-
কভারস্লিপটিকে কোণ করে ফোঁটার প্রান্তের সাথে যোগাযোগ করুন
-
তরল সমানভাবে ছড়িয়ে দিতে ধীরে ধীরে নামান
-
উপযুক্ত বিবর্ধনের অধীনে পরীক্ষা করুন (কখনও 100X ব্যবহার করবেন না)
-
উন্নত কৌশল: কোহলার আলোকসজ্জা এবং অণুবীক্ষণ যন্ত্রের ক্রমাঙ্কন
A. কোহলার আলোকসজ্জা
এই অপ্টিমাইজড আলো পদ্ধতি সুনির্দিষ্ট কনডেনসার এবং ডায়াফ্রাম সমন্বয়ের মাধ্যমে অভিন্ন আলোকসজ্জা এবং সর্বাধিক রেজোলিউশন নিশ্চিত করে।
বাস্তবায়নের পদক্ষেপ:
সঠিক ফোকাসের জন্য আইপিস ডায়োপ্টারগুলি সামঞ্জস্য করুন
-
10X বিবর্ধনের অধীনে একটি দাগযুক্ত স্লাইড স্থাপন করুন
-
প্রায় 25% আলোকসজ্জার জন্য ফিল্ড ডায়াফ্রাম বন্ধ করুন
-
আংশিকভাবে অ্যাপারচার ডায়াফ্রাম বন্ধ করুন
-
ডায়াফ্রামের চিত্রটি তীক্ষ্ণ দেখা না যাওয়া পর্যন্ত কনডেনসার ফোকাস করুন
-
কনডেনসার সমন্বয় স্ক্রু ব্যবহার করে আলোকসজ্জা কেন্দ্র করুন
-
ফিল্ড ডায়াফ্রাম সম্পূর্ণরূপে খুলুন
-
সর্বোত্তম বৈসাদৃশ্যের জন্য অ্যাপারচার ডায়াফ্রাম সূক্ষ্মভাবে সুর করুন
-
B. অণুবীক্ষণ যন্ত্রের ক্রমাঙ্কন
সঠিক পরিমাপের জন্য আইপিস এবং স্টেজ উভয় মাইক্রোমিটার ব্যবহার করে সঠিক ক্রমাঙ্কন প্রয়োজন।
1. মাইক্রোমিটার প্রকার
আইপিস মাইক্রোমিটার (O):
-
একটি আইপিসে স্থাপন করা কাচের রেটিকল যার বিবর্ধন অপরিবর্তিত থাকে
স্টেজ মাইক্রোমিটার (S):
-
জানা মাত্রা সহ ক্যালিব্রেট করা স্লাইড (সাধারণত চিহ্নের মধ্যে 10µm)
2. ক্রমাঙ্কন পদ্ধতি
স্টেজ মাইক্রোমিটার সারিবদ্ধ করুন
-
উভয় মাইক্রোমিটার স্কেল সুপারইম্পোজ করুন
-
সঠিকভাবে শুরু করার পয়েন্টগুলি মেলান
-
দূরবর্তী মিলিত চিহ্নগুলি সনাক্ত করুন
-
সারিবদ্ধ চিহ্নের মধ্যে বিভাগগুলি গণনা করুন
-
চিত্র ক্যাপচার এবং প্রক্রিয়াকরণ: লাইকা অ্যাপ্লিকেশন স্যুট (LAS EZ)
অনেক নির্দেশনামূলক পরীক্ষাগার রিয়েল-টাইম চিত্র প্রজেকশন এবং বিশ্লেষণের জন্য সমন্বিত ক্যামেরা এবং LAS EZ সফ্টওয়্যার সহ লাইকা অণুবীক্ষণ যন্ত্র সিস্টেম ব্যবহার করে।
A. প্রশিক্ষকের অণুবীক্ষণ যন্ত্র সেটআপ
অণুবীক্ষণ যন্ত্রের সাথে পাওয়ার সংযোগ করুন
-
বেস সুইচ ব্যবহার করে সক্রিয় করুন
-
স্লাইডগুলি সঠিকভাবে স্থাপন করুন
-
B. ক্যামেরা পরিচালনা
কম্পিউটারের সাথে USB সংযোগ নিশ্চিত করুন
-
ক্যামেরার নিয়ন্ত্রণ বোতাম ব্যবহার করে পাওয়ার চালু করুন
-
C. LAS EZ সফ্টওয়্যার
উইন্ডোজ অনুসন্ধান এর মাধ্যমে চালু করুন
-
সংযোগের জন্য সময় দিন (1-2 মিনিট)
-
অ্যাকোয়ার, ব্রাউজ এবং প্রসেস ট্যাবগুলির মধ্যে নেভিগেট করুন
-
প্রয়োজন অনুযায়ী ছবি তুলুন বা ভিডিও রেকর্ড করুন
-
প্রসেস মোডে পরিমাপ এবং টীকা তৈরি করুন
-
উপযুক্ত ডিরেক্টরিতে ফাইলগুলি সংরক্ষণ করুন
-
D. প্রজেক্টর ইন্টিগ্রেশন
প্রজেকশন সিস্টেম চালু করুন
-
প্রজেক্টেড ছবি ব্যবহার করে স্লাইডগুলি সারিবদ্ধ করুন
-
সফ্টওয়্যার নিয়ন্ত্রণগুলির মাধ্যমে উজ্জ্বলতা এবং বৈসাদৃশ্য সমন্বয় করুন
-
উপসংহার
অণুবীক্ষণ যন্ত্রগুলি অণুবীক্ষণিক জগতের শক্তিশালী প্রবেশদ্বার হিসাবে কাজ করে। তাদের অপারেটিং নীতি, সঠিক ব্যবহারের কৌশল এবং রক্ষণাবেক্ষণের প্রয়োজনীয়তাগুলি বোঝার মাধ্যমে, গবেষকরা জীবনের মৌলিক কাঠামো এবং প্রক্রিয়াগুলির গভীর অন্তর্দৃষ্টি উন্মোচন করতে পারেন। এই ব্যাপক নির্দেশিকাটি আত্মবিশ্বাস এবং নির্ভুলতার সাথে আপনার অণুবীক্ষণিক অনুসন্ধানগুলি এগিয়ে নেওয়ার জন্য প্রয়োজনীয় মৌলিক জ্ঞান সরবরাহ করে।